IL-27 Reduz o LDLR de Surface Celular em Macrófagos Humanos e Restringe a infecção pelo HIV por VSV-G-Pseudotipo

O que aconteceu

O receptor de lipoproteínas de baixa densidade (LDLR) é um dos principais receptores celulares para a glicoproteína do vírus da estomatite vesiculosa (VSV-G), que é amplamente utilizado para vetores de vírus pseudotipados. Uma replicação incompetente do HIV com VSV-G-pseudotipo (VSV-G-HIVLuc) tem sido utilizada em estudos de infecção pelo HIV. Embora macrófagos polarizados com IL-27 induzam múltiplos genes antivirais e resistam à infecção pelo HIV, seu impacto na infecção por VSV-GHIVLuc não foi estudado. Aqui, avaliamos o papel da polarização da IL-27 na infecção por VSV-G-HIVLuc. A infecção foi monitorizada pela atividade da luciferase. O LDLR de superfície celular foi analisado por citometria de fluxo. Os transcritos de LDLR e a expressão proteica foram quantificados por qRT-PCR e Western blotting, respectivamente. A ligação viral foi avaliada pela medição do antígeno p24 associado à célula, enquanto os eventos pós-entrada foram avaliados pela quantificação de produtos de transcrição reversa tardia. A infecção por VSV-G-HIVLuc em macrófagos induzidos por IL-27 polarizados por M-CSF (27M-Mac) e macrófagos induzidos por IL-27 polarizados por GM-CSF (27GM-Mac) foi reduzida para 5,8 {+/-}0,4% e 5,9 {+/-}2,1%, respectivamente (ambos p<0,0001), em comparação com macrófagos não polarizados. 27M-Mac e 27GM-Mac reduziram o LDLR de superfície celular para 38,3 {+/-}2,6% (p<0,01) e 31,4 {+/-}3,2% (p<0,01). Western blotting mostrou que a proteína LDLR total diminuiu para 48 {+/-}0,8% em 27M-Mac (p<0,01), enquanto 27GM-Mac não apresentou alteração significativa. No entanto, os transcritos de LDLR aumentaram aproximadamente 1,6-1,9 vezes após o tratamento com IL-27 em ambos os tipos de macrófagos (p<0,01). A ligação viral a 27M-Mac diminuiu modestamente, enquanto a ligação a 27GM-Mac diminuiu significativamente para 67,5 {+/-} 7,5% da ligação a GM-Mac (p<0,05, n=3). Em contraste, os produtos de transcrição reversa tardia diminuíram para 23 {+/-} 2,1% (p<0,0001) e 44 {+/-}1,5% (p<0,0001). Esses achados demonstram que a IL-27 desregula a expressão de LDLR de superfície celular em macrófagos, apesar do aumento da abundância de transcritos de LDLR, sugerindo que a IL-27 restringe a infecção por VSV-G-pseudotipada por Lentiviral através de mecanismos associados ao receptor e adicionais pós-entrada.