Células Mononucleares de Sangue Periféricas Criopreservadas Recuperar Função Mitocondrial Após a Cultura Overnight Revelado por Respirometria de Alta Resolução

O que aconteceu

Resumo Fundamento: Respirometria de alta resolução de células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) é amplamente utilizado para avaliar a função mitocondrial, mas a dependência em células recentemente isoladas limita a flexibilidade e loteamento de amostras. O impacto da criopreservação e do manuseio pós-Taw na respiração mitocondrial do PBMC permanece incompleto. Métodos: Os CMSP de adultos jovens saudáveis foram analisados em três condições: recém-isolados, criopreservados e diretamente descongelados, e criopreservados, seguidos de recuperação noturna em meio de cultura suplementado. A respiração mitocondrial foi avaliada utilizando um respirador de alta resolução de Oroboros O2k após permeabilização da membrana plasmática e um protocolo de titulação do inibidor do desacoplamento do substrato. Os parâmetros respiratórios incluíram vazamento, fosforilação oxidativa (OXPHOS), respiração máxima não acoplada e consumo de oxigênio não mitocondrial. Resultados: Os CVPM descongelados diretamente apresentaram redução do fluxo respiratório ATP acoplado e máximo em comparação com células frescas, indicando supressão mitocondrial aguda induzida por criopreservação. Em contraste, os PBMCs submetidos à recuperação noturna apresentaram restauração substancial da função mitocondrial, com OXphoS e respiração desacoplada próxima das células frescas. A viabilidade celular foi comparável em todas as condições. Conclusão: PBMCs criopreservados podem ser usados de forma confiável para a respiração mitocondrial quando um passo de recuperação durante a noite é incluído. Esta abordagem permite o armazenamento de amostras, o loteamento e uma aplicação mais ampla em estudos humanos em larga escala e retrospectivos.