Avaliação de campo de um método simplificado de baixo custo para detectar e caracterizar o Toxigenic V. cholerae O1 a partir de água ambiental em Lagos, Nigéria

O que aconteceu

A cólera é causada pelos serogrupos Vibrio colerae toxigénicos O1 ou O139 e é transmitida através de água ou alimentos contaminados. Métodos convencionais de detecção para V. cholerae em amostras de água ambiental, incluindo filtração de membrana e cultura, normalmente requerem cerca de três dias, equipamentos especializados e experiência técnica. Um método simples e rápido para detectar o V. cholerae O1 na água poderia apoiar a prevenção de surtos, vigilância ambiental e estudos de persistência e transmissão. Aqui, descrevemos um método simplificado e de baixo custo para detecção de V. cholerae O1 toxigênico em água ambiental que pode detectar V. cholerae O1 em 24 horas. Filtramos um litro da água através da gaze, incubamos a gaze em água alcalina peptona (APW) durante a noite a 37?C e testamos a amostra de APW com um teste diagnóstico rápido sorogrupo O1 específico (DRT). Para preservar o material ácido nucleico do caldo APW, colocamos duas gotas em cada círculo de um papel filtro (Whatman 903), secá-lo, e depois analisar o DNA usando PCR e sequenciamento do genoma inteiro. Este método foi avaliado utilizando 95 amostras ambientais coletadas de 17 locais em Lagos, Nigéria. 54 amostras foram positivas para TDR e cada uma destas amostras foi confirmada por cultura e por PCR visando ompW e ctxA como toxigênico V. cholerae O1. O sequenciamento do genoma inteiro identificou esses isolados como pertencentes à linhagem AFR12. Entre as amostras RDT-negativas, a PCR detectou 24 amostras positivas para ompW, mas negativas para ctxA, consistentes com não-toxigênicos não-O1 V. cholerae, e 11 destas foram ainda identificadas como sorogrupo não-toxigênico O139 por qPCR utilizando um ensaio comercial (Bioperfectus). O custo para o teste RDT foi < $2,50 por amostra de água. Esta abordagem baseada em enriquecimento de APW de baixo custo e RDT permite a identificação de água ambiental contaminada com V. cholerae O1 toxigênica em 24 horas e permite a coleta de amostras úteis para posterior caracterização molecular bacteriana.