Análise genética define locais de interação baseada em carga entre Lola e proteínas LolB no tráfico de lipoproteínas

O que aconteceu

A membrana externa (MO) hospeda inúmeras lipoproteínas que desempenham papéis críticos na montagem da OM, homeostase da OM e regulação da parede celular. O tráfico dessas lipoproteínas da membrana interna (MI), onde são secretadas e lipídicas, para a OM é um processo essencial mediado pela via Lol. As lipoproteínas são extraídas do IM pelo complexo transportador LolCDE, transportadas através do periplasma pela chaperona LolA, e transferidas para o LolB, o que facilita sua integração na bicamada lipídica OM. Os detalhes moleculares da função LolB permanecem obscuros. Aqui, geramos uma biblioteca de substituições de aminoácidos simples ao longo da sequência madura de Escherichia coli LolB para rastrear alelos severamente hipomórficos. Validamos nossa biblioteca avaliando um truncamento C-terminal e uma substituição da cisteína lipídica. Nossa tela identificou R49 como um resíduo crucial para a atividade do LolB: perda de sua carga positiva grave comprometimento do crescimento, enquanto a reversão da carga foi letal. A inversão de carga nos resíduos próximos R34 e K45 também levou à perda de viabilidade. Notavelmente, a letalidade de cada alelo lolB revertido por carga poderia ser suprimida por reversão de carga específica e recíproca introduzida em LolA (em resíduos E34, D55 e E74), restaurando a viabilidade. Nossos achados demonstram que resíduos de LolB R34, K45 e R49 são essenciais para mediar uma interação in vivo com resíduos específicos de LolA no periplasma.