Adaptação do ensaio de viabilidade geométrica como um ensaio de alto rendimento para medir a germinação de esporos difficile Clostridioides

O que aconteceu

Clostridioides difficile é a principal causa de infecções hospitalares adquiridas e morte associada à gastroenterite nos Estados Unidos. Como um anaerobe obrigatório, C. difficile baseia-se no esporo aerotolerante metabolicamente dormente para transmitir a infecção. C. infecção difficile começa quando os esporos germinam no intestino delgado em resposta a ácidos biliares específicos e um sinal co-germinante ( quer aminoácidos ou catiões divalentes). Como a germinação é necessária para iniciar a infecção, entender como os esporos sentem germinantes e crescem em células produtoras de toxinas é uma área ativa de pesquisa. Um dos ensaios fundamentais utilizados para estudar a germinação difficile de C. é um ensaio intensivo de recurso e tempo, semelhante a um ensaio de UFC bacteriana, que se baseia em diluições seriadas de uma amostra de esporos banhada em meio ágar em triplicado para determinar o número de esporos viáveis em uma amostra. Como este ensaio é semelhante aos ensaios usados para enumerar bactérias viáveis em uma amostra, hipotetizou-se que uma técnica recentemente desenvolvida de alto rendimento para medir UFCs bacterianas publicada por Meyers et al., o ensaio de viabilidade geométrica (GVA), poderia ser modificado para medir o número de esporos viáveis em uma amostra. Comparamos as medidas de esporos viáveis por mL do ensaio de viabilidade de esporos convencional e do protocolo de VAG modificado e verificamos que as duas medidas foram altamente consistentes entre si (Pearson r=0,991, R2=0,9821). O protocolo de VAG modificado também foi capaz de medir diferenças na sensibilidade aos sinais de germinação em cepas de C. difficile hipersensível a cogerminantes e medir baixos níveis de germinação espontânea. O protocolo GVA é menos intensivo em recursos e tempo do que o ensaio convencional, foi de fácil adaptação, e provavelmente seria viável estudar a germinação em uma ampla gama de esporos-formadores.